卡文思检测拥有多年的酵母双杂交技术服务经验，能够从提供从酵母文库构建、酵母文库筛选、点对点验证的一站式服务，欢迎咨询。
服务优势
酵母双杂交检测服务项目列表
| 服务项目 | 说明 | 周期（工作日） |
|---|---|---|
| 酵母文库构建 | ①RNA提取 ②cDNA合成与接头连接 ③cDNA按长度分离 ④重组到酵母双杂交载体pGADT7上 ⑤文库检测 | 20 |
| 酵母文库筛选 | ①自激及毒性活检 ②文库质粒转化 ③酵母杂交及文库筛选 ④筛选结果测序 ⑤筛选结果回转验证 | 60 |
| 点对点验证 | ①构建 ②转化 ③验证 | 30 |
建库交付标准
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| 酵母文库甘油菌 | ①（文库铺板检测库容量和插入片段长度，通过PCR鉴定转化子的插入片段） ②库容：大于1*107CFU ③平均插入片段：大于800bp ④阳性率：大于90% | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 文库构建报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
筛库交付标准
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| 酵母双杂交文库筛选结果菌株 | ①≤30个阳性克隆质粒 ②含互作的质粒、质粒的大肠菌株、转化好 ③质粒的酵母菌株 | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 文库筛选报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
| 文库筛选图片 | 电子版 | JPG格式 | 常温 |
点对点验证交付标准
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| 重组质粒DNA各一份 | / | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 实验组酵母菌株各一份 | / | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 实验报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
酵母双杂交检测原理
以Gal4 系统为例，BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的AD 则不能与GAL UAS 结合；只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录，从而激活下游报告基因，通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。
实验流程
五、材料要求
1、酵母文库构建
构建指定的酵母双杂交cDNA文库，需提供新鲜的组织、细胞或总RNA，标准如下：
（需要确保样品新鲜或者新鲜的样品保存良好）
细胞样本：细胞数量大于1*107
植物样本：大于2g
动物样本：大于1g 总RNA：大于200μg
2、酵母文库筛选
仅文库筛选，需提供酵母文库，标准如下：
①质粒＞50μg
②阳性率＞90%/菌有效库容＞107
③诱饵蛋白的基因序列
3、点对点验证
Bait及Prey蛋白的基因序列或Bait及Prey的酵母双杂表达载体