PLFA 是活体微生物细胞膜的重要组分,不同类群的微生物能通过不同的生化途径合成不同的PLFA,其中部分 PLFA 可以作为分析微生物量和微生物群落结构等变化的生物标记。PLFA 法就是通过分析这种微生物细胞结构的稳定组分的种类及组成比例来鉴别土壤微生物结构多样性。
表征微生物的PLFA
检测指标 | 检测方法 | 样品要求 | 询价 |
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磷脂脂肪酸(PLFAs):根据NIST库进行磷脂脂肪酸定 | 气相色谱-质谱联用法(GC-MS) | 30g鲜样 |
检测流程
气相色谱质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS),GC-MS以气相色谱作为进样系统,质谱为检测器。其灵敏度较高,可获得更低的检出限,分析效率也高,同时做到定性与定量分析。该系统可识别那些不包括在MIDI系统中的脂肪酸,可排除被MIDI系统错误识别的非酯成分;能分析C8-C20的脂肪酸,还可检测到大于C30的脂肪酸。此法在土壤微生物群落研究中被广泛应用。
(1)能够快速的解读出微生物群落组成是否受到环境变化的影响;
(2)相对于其他方法,能够更敏感地响应微生物群落的变化;
(3)相对于其他方法,能够提供更多微生物表型和活力等生态学层面的信息;
(4) 适合微生物群落的总体分析,而不是专一的微生物物种研究。
PLFA 方法在土壤微生物量、微生物群落表征、土壤微生物生理状态和代谢活动等方面都有广泛的应用。在土壤微生物量的应用,相较于氯仿熏蒸和基质诱导呼吸等方法,PLFA 法更偏重反映有活力的微生物量,而不仅仅是微生物量碳。但转换因子的选择经常不统一,导致结果差异较大。饱和与不饱和脂肪酸比(S/M)、反式顺式比(Trans/Cis)、含环丙基脂肪酸与含前体单不饱和脂肪酸比(Cy/Pre)和聚羟基丁酸与总脂肪酸比(Ph/T)都是在土壤微生物生理状态和代谢活动方面应用的常用指标。PLFA 法经常被用来分析微生物群落结构组成,分析细菌、真菌以及真菌/细菌比等。
(1)从土壤中提取、纯化 PLFA 时,可以采用PLFA/DNA 共提取的方法,将获得更具代表性的结果,减少单独使用一种方法的偏差,同时土壤介质引起的复杂问题将能有所改善,提供我们微生物生态学的新认识。虽然这种方法还存在一定限制,比如获得的 DNA 的量有限而影响结果,但是研究者相信这些使用上的障碍会在广泛应用之前被克服。
(2)PLFA 数据结果解读时,已经有研究把基因水平所得到系统发生学的物种信息,结合PLFA 等经典方法得到的生态学信息共同解释土壤微生物。这种方法的结合,可以发挥多种方法的优势,并弥补一些单独使用一种方法时的不足。
(3)PLFA 方法除了与 DNA 技术的结合,还可以结合稳定同位素技术,这方面技术的结合在分析微生物群落功能及环境响应等方面已经开展了应用。在条件允许情况下,为了能够获得更加全面的微生物多样性信息,应尽可能将多种方法结合起来。相信 PLFA 法随着方法结合和自身创新,继续在土壤微生物生态学研究中扮演重要角色。