氨基酸含量测定


一、概述

氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称,是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动植物营养所需蛋白质的基本物质。分析样品中的氨基酸种类及含量不仅对生物代谢研究具有重要的意义,同时还可以对样品的营养价值进行初步评价。


二、服务指标

氨基酸检测服务列表
检测类型 序号 指标 检测方法 询价
氨基酸检测 1 脯氨酸 茚三酮显色比色法测定
脯氨酸(PRO) 试剂盒测定
钟鼎QQ技术支持
2 半胱氨酸 采用半胱氨酸检测试剂盒测定
3 15种水解氨基酸 参考GB 5009.124-2016以氨基酸分析仪检测所提取样品中水解氨基酸含量
4 17种游离氨基酸 参考GB/T 30987-2020 以氨基酸分析仪检测所提取样品中游离氨基酸含量
5 赖氨酸 茚三酮比色法测定
6 总游离氨基酸 采用茚三酮比色法测定总游离氨基酸含量
7 L-色氨酸 高效液相色谱法
8赖氨酸
9γ-氨基丁酸

三、方法介绍

1、氨基酸自动分析仪法

氨基酸可以采用氨基酸分析仪来测定,这是近年来测定氨基酸应用最为普遍的一种分析方法。 它是由高效液相色谱柱后衍生技术发展而来,原理是在阳离子交换柱上对各组分进行分离, 接着通过酸性缓冲液将各组分洗脱,再让柱后流出液与茚三酮混合共热反应,生成具有可见光吸收的蓝紫色产物再进行检测,这种方法具备仪器稳定性高、操作简便、结果重复性良好和可靠等优点。氨基酸自动分析仪所需的样品分析用量小,可以分析的氨基酸种类多,适用于大多数有条件的实验室,而且衍生剂不直接进入柱子,可以延长柱子的寿命。但是传统的盐酸前处理水解时间要 22 h,耗时长,消耗的能量多,柱后衍生法的反应条件要求又高,流动相配置复杂, 国内主要采用进口仪器,成本昂贵,导致分析费用较高。目前,氨基酸分析仪广泛应用于食品、粮食、饲料的氨基酸检测等方面。

2、高效液相色谱法

HPLC 是在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的分离分析技术。氨基酸的测定可以采用 HPLC 柱前衍生法,由于大多数氨基酸一般都具有较弱的发色团,就需要通过衍生化反应来提高它们的检测能力。该方法具有高灵敏度、广泛适用的性能,分析时间短,被视为经典氨基酸分析技术的替代方法。常用的柱前衍生试剂有异硫氰酸苯酯 (Phenylisothiocyanate,PITC)、9-芴甲基氯甲酸酯(9-Fluorenylmethylchloroformate, FMOC) 等,适用于紫外检测;还有邻苯二甲醛(o-Phthaldiadehyde,OPA)、丹磺酰氯(Dansyl chloride, Dansyl-Cl)等,适用于荧光检测。

3、茚三酮显色法

经典的氨基酸含量测定方法为茚三酮显色法,茚三酮与氨基酸在弱酸条件下(pH5) 作用生成蓝紫色的物质( 脯氨酸除外) ,反应灵敏,分光 光度计检测其在 570 nm 波长处的吸光度值,可确定氨基酸的含量。


四、案例展示

氨基酸案例

五、氨基酸种类

按照营养学分类,氨基酸可分为必需氨基酸、半必需氨基酸和非必需氨基酸。人体所需氨基酸大约有20种,其中色氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸等8种必需氨基酸是人体不能自行合成的,只能通过日常饮食摄入;精氨酸和组氨酸属于半必需氨基酸,通常自身合成的量不能够满足人体需求,在婴幼儿时期这两种属于必需氨基酸;而剩余的 10 种则属于非必需氨基酸。

按照滋味来分,大部分氨基酸具有甜味和苦味,而少数氨基酸则带有酸味和鲜味。氨基酸的味道取决于其侧链基团 R 的疏水性,疏水氨基酸主要呈现出甜味,例如丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸等;亲水氨基酸则以苦味为主,如精氨酸、亮氨酸和酪氨酸等;此外,极性带负电荷的氨基酸则会呈现出明显的酸味,比如谷氨酸、天冬氨酸,这两种也是可以呈现出特殊鲜味的氨基酸,另外鲜味氨基酸还有苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸和酪氨酸。


六、氨基酸的作用

从营养方面来说,氨基酸的缺乏会导致人体的生理功能出现问题,严重时甚至会引发疾病。 因此,氨基酸在人体中发挥着重要的作用,不仅为蛋白质合成提供关键原料,还为人体生长、 正常代谢和生命活动提供物质基础。例如,组氨酸可以用于治疗胃病、消化性溃疡等;酪氨酸可预防老年痴呆,促进新陈代谢,增加食欲;赖氨酸可以促进大脑发育,改善肝功能、人体免疫系统, 增强人体抵抗力。氨基酸不仅对人体重要,对动物的生长也很重要, 氨基酸可以满足动物的营养需要并且促进其生长;饲料中添加赖氨酸可以促进动物对钙的吸收,提高畜肉的质量。

从滋味方面来说, 呈味氨基酸可以赋予食品鲜美的味道, 结合态氨基酸对风味的贡献不大, 而游离氨基酸含量少却对食品风味有很大的贡献,例如甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸等可以作为甜味剂,淡化食物中不愉快的味道;苦瓜、咖啡中含有苦味氨基酸,人们食用苦味食物可以提神醒脑,缓减疲劳;赖氨酸有利于增强海鲜的味道和香气,还能参与美拉德反应改善肉制品风味;丙氨酸可以增加调味效果,通过添加丙氨酸到啤酒等酒精饮料中,可以改善有机酸的口味,使其口感更加醇厚浓郁,并减少酵母产生的异味。


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