硝酸还原酶（Nitrate Reductase，NR）是一种氧化还原酶，是植物硝态氮转化为铵态氮的关键酶，对作物产量及品质都有明显的影响。
一、测定方法
采用离体法测定硝酸还原酶活性。
二、测定原理
硝酸还原酶可将硝酸还原为亚硝酸。
三、实验试剂
亚硝酸钠标准溶液；0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液；1％磺胺溶液；0.02％萘基乙烯胺（盐酸萘乙二胺）溶液；0.1mol/L KNO3溶液；0.025mol/L pH8.7的磷酸缓冲液；提取缓冲液；2mg/ml NADH溶液。
四、实验步骤
①制作标准曲线
取7支洁净烘干的15ml刻度试管按表1顺序加入试剂，配成0～2.0μg的系列标准亚硝态氮溶液。摇匀后在25℃下保温30min，然后在540nm下比色测定。以亚硝态氮（μg）为横坐标（x），吸光度值为纵坐标（y）建立回归方程。
| 编号 | 亚硝酸钠标准液（ml） | 蒸馏水（ml） | 1％磺胺（ml） | 0.02％萘基乙烯胺（ml） | 每管含亚硝态氮（μg） |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 0.0 | 2.0 | 4 | 4 | 0 |
| 2 | 2.0 | 1.8 | 4 | 4 | 0.2 |
| 3 | 0.4 | 1.6 | 4 | 4 | 0.4 |
| 4 | 0.8 | 1.2 | 4 | 4 | 0.8 |
| 5 | 1.2 | 0.8 | 4 | 4 | 1.2 |
| 6 | 1.6 | 0.4 | 4 | 4 | 1.6 |
| 7 | 2.0 | 0.0 | 4 | 4 | 2.0 |
②样品中硝酸还原酶活力测定
I酶的提取
称取0.5g鲜样，剪碎于研钵中置于低温冰箱冰冻30min，取出置冰浴中加少量石英砂及4ml提取缓冲液，研磨匀浆，转移于离心管中在4℃、 4000r/min下离心15min，上清液即为粗酶提取液。
II酶的反应
取粗酶液0.4ml于10ml试管中，加入1.2ml 0.1mol/L KNO3磷酸缓冲液和0.4ml NADH溶液，混匀，在25℃水浴中保温30min，对照不加NADH溶液，而以0.4ml 0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液代替。
III终止反应和比色测定
保温结束后立即加入1ml磺胺溶液终止酶反应，再加1ml萘基乙烯胺溶液，显色15min后于4000r/min下离心5min，取上清液在540nm下比色测定吸光度。根据回归方程计算出反应液中所产生的亚硝态氮总量（μg）。
五、结果分析
样品中硝酸还原酶活性[μg/（g•h）]=X/Vs×Vt/（W×t）
X——反应液酶催化产生的亚硝态氮总量μg；
Vt——提取酶时加入的缓冲液体积mL；
Vs——酶反应时加入的粗酶液体积mL；
W——样品鲜重g；
t——反应时间h。