叶片衰老最明显的事件是叶绿素的损失。叶绿素降解以一个特征良好的途径进行，虽然在高等植物中很常见，但产生一组物种特定的叶绿素分解代谢产物，称为叶胆素。利用高效液相色谱(HPLC)分析叶绿素降解和叶胆素积累是研究植物衰老过程的一个有价值的工具。

卡文思提供叶绿素及其降解产物的提取、分离和定量服务。所用方法有助于在各种植物物种、不同组织中以及在涉及叶绿素损失的各种生理条件下的叶绿素降解分析和叶绿素分解代谢物的鉴定。

一、叶绿素的提取

1、收获绿色或衰老的植物材料，并立即在液氮中快速冷冻。存储在−80°C，直到使用。

2、用研钵和杵在液氮中将植物磨成细粉。

3、将50-100毫克的植物材料放入一个微离心管中（在液氮中预冷），并将样品保存在液氮中直到提取。

4、色素提取，在冰或4°C下工作。在冷冻的植物材料中加入5-10体积的氯提取缓冲液（v/w），剧烈涡旋10 s左右，直到植物材料解冻。

5、在-20°C的黑暗中孵育2-16小时，直到所有色素被提取到缓冲液中。

6、用微离心机在16,000×g和4°C下离心2 min。将上清液转移到一个新的微离心管中，立即闪冻并保存在液氮中，直到HPLC分析。

二、叶胆素的提取

1、收获绿色或衰老的植物材料，并立即在液氮中快速冷冻。存储在−80°C，直到使用。

2、用研钵和杵在液氮中将植物磨成细粉。

3、将100-200毫克的植物材料放入微离心管（液氮预冷），将样品保存在液氮中直到提取。

4、加入3体积的叶胆素提取缓冲液（v/w），剧烈涡旋约10-15s，直到植物物质解冻并与缓冲液均匀混合。

5、在冰冷的超声浴中进行超声波处理10 min。

6、用微离心机在16,000×g下离心5 min，然后将上清液转移到一个新的1.5 mL微离心管中。

7、用微离心机将上清液以16,000×g重新离心5 min，并将100-200μL的上清液转移到HPLC小瓶中

三、叶绿素的HPLC分析和定量分析

1、在注射前从液氮中取出样品，然后解冻。将一个已定义的卷(例如，50μL)注入HPLC系统，并运行以下HPLC程序。 2、用于叶绿素含量分析的HPLC程序（流速1 mL min-1）：

3、校准：向HPLC中注入规定数量的Cj-NCC-1标准溶液。整合315 nm处的峰面积，并确定吸收与量/浓度之间的关系。

4、通过比较与标准溶液的吸收光谱和峰的保留时间来确定样品中存在的叶绿素。

5、在665nm处的峰面积，并使用标准溶液计算的因子转换为量/浓度。

使用HPLC系统的叶绿素的近似保留时间

四、叶胆素的HPLC分析

1、将样品放于HPLC系统的预冷（7-10°C）自动进样器中。通过使用以下HPLC程序注入已定义的体积(例如，50μL)来运行这批样品。

2、用于叶胆素分析的HPLC程序(流速1 mL min-1)：

3、校准：向HPLC中注入规定数量的Cj-NCC-1标准溶液。整合315 nm处的峰面积，并确定吸收与量/浓度之间的关系。

4、通过254 nm的筛选色谱图识别样品中存在的叶胆素，并寻找不同类型的叶胆典型的紫外/可见吸收光谱的峰。

5、对于NCCs的定量，整合320nm处的峰面积，并使用Cj-NCC-1标准计算的因子转换为数量/浓度。

6、拟南芥衰老叶片中主要叶胆素的保留时间列于上表中。

公司介绍

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1、资质齐全

2019年，实验室取得了中国检验检测机构资质认定CMA证书，可向社会出具具有证明作用的数据和 结果，具有法律效力。同年，实验室参加的标准样品研究所组织的2019年度 IERM T19-33 土壤中重 金 属 检 测 能 力 验 证 项 目，砷 、汞 指 标 通 过 验 证 。

2、仪器先进

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