1.原理

    叶绿体色素在照光时能辐射出荧光。研究叶绿体色素荧光性质,有助于了解它的分子激发态.分子之间的能量传递以及分子在活体内的排列。叶绿体光诱导荧光强度的变化(以下简称可变荧光)是由于叶绿体吸收光能后,光能在转化和电子传递过程中受阻,能量不能正常地传递下去,而以荧光的形式释放出来,使荧光的强度增加。如果这种变化是由光的影响引起的,就叫光诱导的可变荧光。当然,也可由其他条件诱导可变荧光。

    在室温条件下,叶绿体在685nm处呈现一个荧光发射峰,它是由光系统II发射出来的,这部分荧光称为固定荧光(F₀),是物理性的,它与光系统II的原初.反应和电子传递无关。当对叶绿体进行光诱导时发射出的荧光叫可变荧光(△F)。固定荧光和可变荧光之和称为总荧光(Fmax)。由此可见，可变荧光(△F)可以代表光系统II反应中心可能利用及转化能量的能力。所以,△F在一定程度上代表光系统II反应中心的活性。面可变荧光与固定荧光的比值则表示光系统II的光能转换效率。因此，可作为叶绿体光化学活性的一个重要指标。

2.材料、仪器设备及试剂

(一)材料

    玉米菠菜叶片。

(二)仪器没备

    冰箱,组织捣碎机,冷冻离心机,玻璃匀浆器,动力学分光光度计。

(三)试剂

    叶绿体制备缓冲液(简称制备液)。0.05 mol/L磷酸缓冲液,内含0.3 mol/L蔗糖和0.1mol/L KCl,pH 7.2。

3.实验步骤

    (1)叶绿体的制备。称取10g弃去大叶脉的新鲜植物叶片.先用自来水冲洗,再用蒸馏水洗净,吸干水分后,放在冰箱里冷冻。然后用剪刀剪碎,置于预冷的组织捣碎机的玻璃缸内,加入50mL制备液,用4层纱布将匀浆过滤,滤液在0℃下用1000xg离心10min。弃去上清液,在沉淀中加人40mL制备液悬浮，再次用1000xg离心10 min,取出沉淀,用15 mL制备液在玻璃匀浆器内匀浆,则得叶绿体悬浮液备用。

    (2)调整仪器。将仪器调整好,并把必要的参数调到预定值,使仪器运转正常。在光电倍增管前加一个684nm的滤光片,并把激发光波长调到436nm或480nm。

    (3)调整基线。将空白缓冲液倒人比色杯中,放人样品室的样品架上,打开激发光,记录基线，如果信号过大，说明滤光片漏光，需更换。

    (4)样品测定。将待测的叶绿体样品放人比色杯，并放到样品室内。打开激发光,记录固定荧光。再打开诱导光，记录;最大荧光强度(Fmax)见图1。

4.计算结果

    根据记录的图谱,计算出固定荧光(F₀)和总荧光(Fmax)的数值,并按下述公式计算可变荧光和可变荧光率。

 

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