单宁分子式

1、范围

本方法适用于菜籽饼中单宁含量。

2、原理

油菜饼中单宁用F-D试剂显色反应，分光光度法检测。

3、试剂

（1）1mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液：称重40g氢氧化钠（NaOH）（化学纯）溶于蒸馏水，定容至1000mL。

（2）0.01mol/L乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）溶液：称3.7224g乙二胺四乙酸二钠盐[C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂]溶于蒸馏水，定容至1000mL。

（3）F-D试剂：于盛有750mL水的1000mL烧瓶中加入钨酸钠[Na₂Wo₄·2H₂O]100g、磷钼酸[H₇[P(Mo₂O₇)6]·H₂O]20g及磷酸[H₂PO₄]50mL回流2h，冷却后稀释成1000mL。

（4）单宁酸标准液：精确称量纯单宁酸[C₇₈H₅₂O₄₀]50mg溶于500mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液中单宁浓度为100mg/L。避光保存冰箱内，24h内稳定。

4、仪器设备

紫外可见分光光度计。

5、操作步骤

（1）确定吸收波长范围

用紫外可见分光光度计对单宁标准液进行扫描，找出最大吸收峰位置，确定出测量波长为760nm。

（2）浓度因子的确定

准确吸取不同量的单宁标准液分别放入盛有50mL蒸馏水的100mL比色管中，加入4mLF-D试剂，混匀后放置5min，再加入6mL0.01mol/LEDTA溶液，混匀后加入10mL氢氧化钠溶液，最后用蒸馏水定容至刻度，放置30min于760nm处比色，在相同条件下以蒸馏水代替单宁标准液做空白调整分光光度计的零点。记下各标准单宁浓度的吸收值，按下式求浓度因子f。

式中：f——浓度因子；
c——标准单宁溶液的浓度；
A——在该浓度时的吸收值。

（3）菜籽饼中单宁的提取及测定：

①称取过40目筛的菜籽饼试样各2g，于100mL三角瓶中，加蒸馏水50mL于60℃~65℃保温箱中过夜（保温10h以上）将清液过滤入200mL容量瓶中，向三角瓶中加入30mL热水，并于80℃左右水浴中提取20min，清液滤入原容量瓶中，再加入30mL热水并于80℃水浴中提取，依此重复3次~4次，直至提取液与稀氯化铁(Fecl₃)溶液不生成绿色或兰色产物，定容至200mL摇匀。

②吸收提取液5mL于盛有50mL蒸馏水的100mL比色池中，以下同测浓度因子，分别依次加入4mLF-D、8mLEDTA及10mLNaOH溶液，放置30min后在波长760nm处比色，测定未知样品的吸光值A，按c=F·A求出样品的浓度。

6、结果计算

单宁含量X按下式计算。

式中：X——单宁含量，g/kg；
c——单宁浓度数，mg；V——提取液定容体积，mL
V₀——比色时吸取提取液体积，mL；
m——试样质量，g。
必须做双样，结果以两次测定的计算平均值表示，两次测定的结果相对偏差不超过3%。