1.范围

本方法适用于油料制品中蛋白质的测定。

2.原理

蛋白质是含氮的有机化合物。油料制品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

3.试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

(1)硫酸铜。	(5)混合指示液: 一份o.1%甲基红乙醇溶液与五份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用两份0.1%甲基红乙醇溶液与一份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
(2)硫酸钾。	(6)40%氢氧化钠溶液。
(3)硫酸。	(7)0. 1 mol/L硫酸标准溶液或0. 05 mol L盐酸标准溶液。
(4)2%硼酸溶液。

4.仪器设备

(1)检测实验室常用仪器设备。

(2)定氮蒸馏装置定氮仪。

5.操作步骤

(1)样品处理:精密称取0.2g~2.0g固体样品或2g~5g半固体样品或吸取10 mL~20 mL液体样品(约相当氮30 mg~40 mg),移人干燥的100 mL或500 mL定氮瓶中，加人0.2 g硫酸铜,3g硫酸钾及20 mL硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以 45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部碳化,泡沫完全停止后，加强火力,并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5 h。取下放冷,小心加20 mL水。放冷后，移人100 mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。

(2)按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约三分之二处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

(3)向接收瓶内加人10 mL 2%硼酸溶液及混合指示液一滴,并使冷凝管的下端插人液面下,吸取10.0 mL样品消化稀释液由小漏斗流入反应室，并以10 mL水洗涤小烧杯使流人反应室内,塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10 mL 40%氢氧化钠溶液倒人小玻杯，提起玻塞使其缓缓流人反应室，立即将玻塞盖紧,并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸气通人反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5 min.移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面再蒸馏1 min.然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.1 mol/L碗酸或0.05 mo/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10. 0 mI试剂空白消化液按(3)操作。

6.结果计算

样品中蛋白质含量(X)按下式计算,其数值以%表示:

式中: X-样品中蛋白质的含量，%;

V₁——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,mL;

V₂——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,mL;

M——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;

0.014——0.5 mol/L硫酸或盐酸标准溶液1 mL相当于氮克数;

m——样品的质量(或体积)，g(或mL);

f——氨换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量-般为 15%~17. 6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，花生为5.46,大豆及其制品为5.71,芝麻、向日葵为5. 30。

参考资料

GB/T5009.5-2003食品中蛋白质的测定