目的要求
学习果蔬组织中总酚物质、类黄酮与花青素含量的快速测定方法。
基本原理
果蔬组织中大量存在着酚类物质( phenolic compounds)、类黄酮类( flavonoids )和花青素(anthocyanin)等植物次生代谢产物,它们与果蔬的色泽发育、品质和风味形成、成熟衰老过程、组织褐变、抗逆性和抗病性代谢等作用密切相关,对果蔬的贮藏、加工性能,果蔬的营养价值和医疗保健作用都具有重要影响。
利用甲醇溶液从果蔬组织中提取总酚物质、类黄酮类和花青素。根据总酚物质、类黄酮和花青素的甲醇提取液的吸收光谱特性,可利用紫外可见分光光度计在特定波长下测定其吸光度值,进而与标准曲线比较,计算出含量。此法简单易行,重复性好。
材料、仪器及试剂
(一)材料
苹果、梨等。
(二)仪器及用具
研钵、具塞刻度试管(20mL)、滤纸漏斗、移液器、紫外可见分光光度计。
(三)试剂
1% (体积分数)盐酸-甲醇溶液。
取1.0mL浓盐酸(分析纯)，加入到99mL甲醇中摇匀,于4℃预冷。
实验步骤
(一)提取
称取2.0g果肉组织或0.5g果皮组织，加入少许经预冷的1%HCl-甲醇溶液,在冰浴条件下研磨匀浆后,转人20mL刻度试管中。用1%HCI-甲醇溶液冲洗研钵,一并转移到.试管中,定容至刻度,混匀,于4℃避光提取20min ,期间摇动数次,然后过滤，收集滤液待用。
(二)滴定
以1%HCl-甲醇溶液作空白参比调零,取滤液分别于波长280nm325nm.600nm和530nm处测定溶液的吸光度值,重复三次。
实验结果与计算
1.测定数据记录
2.计算结果
以每克(鲜重)果蔬组织在波长280nm处吸光度值表示总酚含量,即0D280/g;在波长325nm处吸光度值表示类黄酮物质含量,即OD325/g;在波长530nm和600nm处吸光度值之差表示花青素含量(U),即U=(OD530-0D600)/g。
注意事项
(1)提取液中所加的盐酸,是用来沉淀样品中的蛋白质，以减少蛋白质对提取液吸光度值的影响。如果样品含蛋白质较多时,可加大盐酸浓度,或使用三氯乙酸沉淀蛋白质。
(2)此方法仅能判断测定样品之间总酚、类黄酮和花青素的相对含量。如果需要测定准确的含量,需要与标准曲线进行比较。可以用不同浓度的没食子酸制作标准曲线,计算总酚物质含量，用pumol/g mp表示。用不同浓度的芦J制作标准曲线,计算类黄酮含量。根据所测试果蔬组织中花青素的种类,需选用相应的物质制作标准曲线进行含量的计算。
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