原理：

      3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖(各种单糖和麦芽糖)溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和棕红色物的颜色深浅的程度成-定比例关系。在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度,查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。

材料、仪器设备及试剂

(一)材料

      食用面粉。

(二)仪器设备

      食用面粉。

      离心机电子天平,分光光度计,刻度试管,大离心管或玻璃漏斗,烧杯,三角;瓶,容量瓶,刻度吸管,沸水浴。

(三)试剂

      (1)1mg/mL葡萄糖标准液:准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80C烘至恒重>,置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。

      (2)3,5-二硝基水杨酸试剂:6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262mL 2mol/LNaOH溶液,加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1 000 ml,贮于棕色瓶中备用。

      食用面粉。

      食用面粉。

      食用面粉。

实验步骤

1.制作葡萄螗标准曲线

      取7支具有25mL刻度的血糖管或刻度试管,编号,按表1所示的量,精确加人浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。

表1 绘制葡萄糖标准曲线的试剂量
项目	管号
	0	1	2	3	4	5	6
葡萄糖标准液/mL	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	1.2
蒸馏水/mL	2.0	1.8	1.6	1.4	1.2	1.0	0.8
3.5-二硝基水杨酸试剂/mL	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
相当于葡萄糖量/mg	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	1.2

 

      将各管摇匀,在沸水浴中加热5min,取出后立即放人盛有冷水的烧杯中冷却至室温,再以蒸馏水定容至25mL刻度处,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀(如用大试管,则向每管加人21.5mL蒸馏水,混匀)。在540nm波长下,用0号管调零,分别读取1-6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线,求得回归方程。

2.样品中还原糖的测定

      (1)样品中还原糖的提取:准确称取3g食用面粉,放在100mL的烧杯中,先以少量蒸馏水调成糊状,然后加50mL蒸馏水,搅匀,置于50C恒温水浴中保温20 min,使还原糖浸出。离心或过滤,用20 mL蒸馏水洗残渣,再离心或过滤，将两次离心的上清液或滤液全部收集在100mL的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。

       (2)显色和比色:取3支25mL刻度试管,编号,分别加入还原糖待测液2mL,3,5-二硝基水杨酸试剂1.5mL,其余操作均与制作标准曲线相同,测定各管的吸光度。

结果计算

      分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数,按下式计算还原糖的百分含量。