淀粉是光合作用的终产物之一，也是淀粉贮存库中最主要的贮存物质。植物组织中的淀粉磷酸化酶（α-葡萄糖磷酸化酶）亦称α-1，4-葡萄糖-正磷酸葡萄糖基转移酶，它能在pH7.0-7.5条件下催化淀粉水解为1-磷酸葡萄糖，也能在pH5.1-6.8条件下催化G-1-P合成淀粉，在淀粉代谢中起着重要的作用。

1.原理

    淀粉磷酸化酶能催化葡萄糖-1-磷酸聚合成淀粉，并释放出无机磷，可通过测定释放的无机磷的量来表示酶活性的大小。

2.试剂

(1).100 mmol·L^-1 Tris-MES（pH7.2）缓冲液，内含1%PVP（质量浓度）为酶的提取介质。
(2).100 mmol·L^-1 Tris-MES（pH6.0）缓冲液，内含1 mmol·L^-1 NaF，0.5%可溶性淀粉（质量浓度），即酶的反应介质。
(3).10 mmol·L 1-磷酸葡萄糖（G-1-P）。
(4).5%三氯乙酸（TCA）
(5).定磷试剂
(6).无机磷贮备液

3.方法步骤

3.1.制作标准曲线

3.2.样品测定

（1）酶液提取：剥取小麦籽粒10-30粒。称重放入预冷的研钵中，按W:V=1：5加入酶提取介质，快速冰浴中研磨成匀浆。研磨液经4层纱布过滤后，在4℃12000g离心10min倒出上清液即为粗酶液。
（2）酶活性反应：取试管3支，加入0.2mL反应介质，0.65mL蒸馏水，0.05mL酶液，最后加入0.1mL G-1-P起始反应，在30℃水浴中保温10min。加入0.5mL 5%TCA终止反应。对照先加入TCA再加酶液，其他操作步骤同上。将反应后的溶液在4000g离心10min弃去沉淀。取上清液作无机磷测定。
（3）无机磷的测定：吸取上清液0.3mL加入试管，加蒸馏水2.7mL,再加3mL定磷试剂后摇匀，在45℃水浴中保温25min，取出冷却至室温，于660nm波长下测定吸光度，从标准曲线查得Pi含量。

4.结果计算

将测定的样品液的吸光度代入到标准曲线方程式中，计算出相应的硝态氮含量，然后按下式计算植物组织硝态氮含量：

式中，C：从标准曲线查得的无机磷量（μg）；FW：样品鲜重（g）；t：反应时间（min）；Vt：提取酶液总体积（mL）；Vs：测定时取用酶液体积（mL）；n：提取液测定中的稀释倍数（×5）。

5.注意事项

G-1-P易分解，应现配现用。