常规测定抗坏血酸的方法是采用2,6-二氯酚靛酚滴定法,但因某些叶片中花青素量较高,当用酸提取时呈红色,因而无法滴定。本试验采用二甲苯萃取比色法,则不受花青素的干扰。关于滴定法可以参考《维生素C含量测定方法-滴定法》。

1.原理

    向一定量提取液中加人过量的2,6-二氯酚靛酚染料溶液与维生素c作用后，多余染料用二甲苯萃取比色。待测液中抗坏血酸的含量与二甲苯萃取的颜色呈线性负相关,即待测液中抗坏血酸含量越多,未被还原的染料就越少,二甲苯萃取的颜色也就越浅。由于水溶性的花青素不溶于二甲苯,因而不影响测定结果。

2.材料、仪器设备及试剂

⑴材料

    新鲜甘蓝叶片、白萝卜等。

⑵仪器设备

    722型分光光度计,容量瓶,研钵,不锈钢刀,具塞大试管。

⑶试剂

    ①1%草酸。

    ②2%草酸。

    ③30%硫酸锌。

    ④15%亚铁氰化钾。

    ⑤染料溶液:称取100 mg2,6-二氣酚靛酚和82 mg碳酸氢钠溶于约60mL热水中，过滤定容至100mL容量瓶中，倒入棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4倍,此溶液每毫升约相当于0.1 mg的维生素C。

    ⑥抗坏血酸标准溶液:精确称取100 mg分析纯抗坏血酸,溶于1%草酸,定容至100 mL,再从中吸取5 mL,用1%草酸再稀释至100 mL,稀释后每毫升含抗坏血酸0.05mg(标准溶液在使用前临时配制)。

    ⑦二甲苯:分析纯(本法使用过的二甲苯可用20% NaOH中和后,蒸馏回收)。

3.实验步骤

    (1)标准曲线

    取具塞大试管6个.分别吸取抗坏血酸标准溶液0mL、1mL、2mL、2.5mL、3mL、4mL,用1%草酸补充至4mL。各管中抗坏血酸含量相应为0、0.05mg、0.10 mg、0.125 mg 、0.15 mg、0.20mg。各管中加入染料溶液2 mL,随即加入二甲苯5 mL,迅速摇动约0.5 min,静置后二甲苯与水层分离,将上层二甲苯萃取液轻轻倒入lcm比色杯,在500nm波长下测定吸光度。以二甲苯作空白调零,求得标准系列抗坏血酸毫克数与相应的吸光度值的四归方程。

    (2)样品提取

    取新鲜蔬菜洗净,擦干,在玻板上用不锈钢刀切碎混匀。称取2g样品放至研钵中,加入3mL2%草酸研磨至匀浆，然后将匀浆倒至100mL容量瓶中,残渣用1%草酸冲洗,洗液一并倒至容量瓶中,加人1mL 30%硫酸锌,摇动容量瓶,再加人1mL15%亚铁氰化钾,以除去脂溶性色素,再用1%草酸定容至刻度，摇匀后过滤到干净小烧杯中。

    (3)测定

    取上述提取液4mL(若抗坏血酸含量高,叮适当减少取量,不足4mL的可用1%草酸补足至 ml.)至具塞大试管中,依次加入染料2mL、二甲苯5 mL,按照标准曲线的方法测定吸光度。

4.计算

    式中:X为4mL提取液中含抗坏血酸的毫克数;V_t为提取液总体积,mL;W为样品鲜重,g; V_m为测定用体积量,mL。

    以上就是我们对维生素C含量测定方法-比色法的整合，更多相关检测，请联系我们。