维生素C（又称抗坏血酸，VC）是植物材料中普遍存在的一类酸性、还原性物质，也是维持人类健康所必需的的维生素类物质之一。维生素C含量的多少与果蔬的品质、营养价值、抗病及抗衰老能力直接相关。所以，研究中经常需要测定维生素C的含量。

　

    维生素C可分为还原型和脱氢型两种。根据其具有还原性的性质，有多种方法可以测定维生素C含量。一般有2，6-二氯靛酚滴定法、荧光比色法和钼蓝比色法，前者用于测定还原性维生素C，后两种用于测定总维生素C含量。这里我们主要介绍钼蓝比色法。

钼蓝比色法原理：

    钼酸铵在SO₄2-和PO₄3-存在下与维生素C反应，生成蓝色络合物（钼蓝），在760nm处有最大吸收。当维生素C浓度在2-40μg·mL^-1范围内，符合朗伯-比尔定律。新鲜植物样品中的还原糖及常见的还原物质不干扰测定，而且反应迅速，专一性好。

试剂

(1).5%钼酸铵溶液：称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100mL。
(2).草酸-EDTA溶液：称取6.30g草酸和0.75g EDTA-Na₂溶于蒸馏水中并定容至1000mL。
(3).5%（体积分数）H₂SO₄
(4).偏磷酸-乙酸溶液：取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48mL，溶解后加蒸馏水稀释至100mL（必要时过滤），在冰箱中可保存3d。
(5).维生素C标准溶液：精确称取分析纯维生素C 100mg，置100mL容量瓶中，加适量草酸EDTA溶液溶解后，再用该溶液定容到100mL刻度，即成1mg·mL^-1之标准液，此溶液随配随用（如果维生素C纯度不够，应进行标定）。

方法步骤：

1.制作标准曲线

试剂	试管号
	1	2	3	4	5	6
维生素C标准液/mL	0.0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
草酸 EDTA/mL	5.0	4.8	4.6	4.4	4.2	4.0
偏磷酸-乙酸/mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
1：19 H2SO4/mL	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
5%钼酸铵/mL	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
维生素C含量/mg	0	20	40	60	80	100

    加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释到25mL刻度，将溶液混匀，用1号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以标准维生素C含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2.样品的提取与测定：

    称取小麦叶片或其他植物组织2-5g（根据维生素C含量而定），加5mL草酸EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25mL容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵及研锤2-3次，冲洗液合并于25mL容量瓶中。取一部分匀浆液经3000g离心10min后，取1mL上清液与标准管同法测定。若样品显色液中出现沉淀时，可过滤后进行比色，不影响测定结果。

    式中，C：标准曲线上查得样品中维生素含量（mg）；V_t：样品提取液总体积（mL）；V_s：测定时用样品提取液体积（mL）；FW：植物组织鲜重（g）。

附注

    温度对显色有影响，颜色强度随时间的延长而加深，因此显色温度和加入显色剂后的时间要求一致。